常規(guī)的相對豐度分析忽略了不同樣本之間總體微生物量存在的現(xiàn)實差異,造成了分析結果的偏差。而絕對定量分析則是計量樣本每種微生物的16S基因拷貝數(shù)或者細胞數(shù)目,從而實現(xiàn)絕對定量,因此相對于常規(guī)16S相對定量擴增子測序,絕對定量分析能反映樣本每種微生物的真實數(shù)量和組間樣本的真實差異。
百邁客運用高通量測序技術和spike-in內(nèi)標法實現(xiàn)對細菌的絕對定量。通過在樣品中加入已知拷貝數(shù)的spike-in內(nèi)參序列,與樣品同時進行擴增、建庫測序,然后通過內(nèi)參的理論拷貝數(shù)與測序tags數(shù),繪制標準曲線,結合標準曲線及樣品的組織、核酸、擴增用量等計算得到OTUs/ASVs的絕對拷貝數(shù)表。能夠一次獲得所有細菌的絕對定量結果,包括總豐度和每種菌的豐度。
產(chǎn)品類型 | 支持區(qū)域 | 數(shù)據(jù)量 | 分析內(nèi)容 |
---|---|---|---|
細菌絕對定量(三代) | 16S全長 | 1W CCS | 常規(guī)擴增子分析+絕對定量 |
細菌絕對定量(二代) | 16S V3-V4,16S V4 | 5W tags | 常規(guī)擴增子分析+絕對定量 |
組織類型 | 送樣量 |
---|---|
土壤 | 1~2g |
糞便 | 0.5~2g |
備注:上述組織送樣量均為三次提取的量
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