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微生物QPCR

快速、準(zhǔn)確地測(cè)定目標(biāo)微生物數(shù)量

微生物QPCR簡(jiǎn)介

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-time Quantitative PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入可與DNA產(chǎn)物特異性結(jié)合的熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最終通過(guò)相對(duì)定量或絕對(duì)定量的方法確定各個(gè)樣本的本底表達(dá)量。微生物QPCR可用于快速、準(zhǔn)確地測(cè)定目標(biāo)微生物數(shù)量。

結(jié)果展示

目的基因的 qPCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，16s 標(biāo)準(zhǔn)品的制備及樣品的 qPCR 擴(kuò)增（左：擴(kuò)增曲線、右：熔解曲線）
標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線
目的基因的擴(kuò)增曲線
目的基因的擴(kuò)增曲線
目的基因的溶解曲線
目的基因的溶解曲線
基因標(biāo)準(zhǔn)曲線
基因標(biāo)準(zhǔn)曲線：拷貝數(shù)log值
拷貝數(shù)換算
拷貝數(shù)換算

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)豐富，水體、土壤、糞便等樣本類型均可承接；

每個(gè)反應(yīng)均為3個(gè)重復(fù)，結(jié)果穩(wěn)定性好；

SYBR 熒光染料法和 Taqman 探針?lè)▋煞N方法均可提供。

微生物QPCR常見(jiàn)問(wèn)題

相對(duì)定量?jī)?nèi)參選擇標(biāo)準(zhǔn)是什么？

  1. 在不同處理中表達(dá)穩(wěn)定性較高的基因；
  2. 中等或高表達(dá)基因。

真核生物常見(jiàn)內(nèi)參：18S rRNA、β-actin、GAPDH、EF-1α等；原核生物：16S rRNA、gyrB等。如果無(wú)法確定內(nèi)參，建議參考文獻(xiàn)，或者做內(nèi)參篩選實(shí)驗(yàn)。

如何選擇適合的引物和探針？

引物和探針的選擇需要考慮到目標(biāo)微生物的特異性和保守性?？梢允褂霉_(kāi)可獲得的微生物基因數(shù)據(jù)庫(kù)，如NCBI，進(jìn)行引物和探針設(shè)計(jì)。此外，確保引物和探針的互補(bǔ)性和避免引物之間的重疊和相互作用也很重要。

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