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點(diǎn)開有驚喜
——買試劑送全國功能基因組峰會(huì)報(bào)名

提問1:我的qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果,復(fù)孔重復(fù)新性差,具體是什么原因?qū)е碌模?/p>

回復(fù): 1)誤差導(dǎo)致,建議加樣過程中,使用精密的移液器,且可增大反應(yīng)體系。

2)儀器長時(shí)間未校準(zhǔn),建議將儀器定期校準(zhǔn)。

提問2:擴(kuò)增曲線未達(dá)到平臺(tái)期,如何改善?

回復(fù): 1)模板量太低,可適當(dāng)增加模板量。

2)循環(huán)數(shù)太少,可適當(dāng)增加循環(huán)數(shù)。

3)基因表達(dá)豐度低,建議增加模板量,或者選擇合適的試劑盒,確保 能檢測出較低基因的表達(dá)水平。

除此之外,在qPCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)過程中,還會(huì)出現(xiàn)Ct值偏大、特異性差、熒光強(qiáng)度弱、不適合特有的機(jī)型等問題。為了解決以上問題,百邁客推出的一款Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix試劑盒,具有全平臺(tái)通用、特異性強(qiáng)、擴(kuò)增性能優(yōu)越、靈敏度高等特點(diǎn)。

產(chǎn)品簡介

Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix采用SYBR? Green I 嵌合熒光法進(jìn)行qPCR反應(yīng),通過對SYBR? / FAM通道進(jìn)行熒光信號(hào)定量檢測,可以獲得PCR過程中DNA擴(kuò)增的真實(shí)數(shù)據(jù)。Taq DNA酶采用抗體法熱啟動(dòng)進(jìn)行擴(kuò)增,可以有效抑制引物退火導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增,極大地提高產(chǎn)品的特異性。且試劑盒中含有特殊的ROX Reference Dye,適用于所有qPCR儀器。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.兼容性完美,全平臺(tái)通用:提供ROX Reference Dye I和II預(yù)混液,適用于所有主流定量PCR儀器。

2.靈敏度高:采用獨(dú)特優(yōu)化的反應(yīng)Buffer,可檢測低至10 pg的cDNA模板。

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圖1:將質(zhì)粒進(jìn)行8個(gè)10倍梯度稀釋,以5×107~100拷貝/μl的質(zhì)粒為模板,進(jìn)行擴(kuò)增。發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增效率高,且可獲得良好的線性關(guān)系。

3.擴(kuò)增性能優(yōu)越:短時(shí)間內(nèi)可反復(fù)凍融10次以上,擴(kuò)增曲線依然呈現(xiàn)特征單峰,擴(kuò)增效率依然很高。

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圖2:以1 μg不同物種的RNA為模板(藍(lán)色:人肝癌細(xì)胞;青色:雞;紅色:斑馬魚;黑色:水稻種子),用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,得到cDNA產(chǎn)物。再以100 ng不同物種的 cDNA為模板,用反復(fù)凍融10次以上的Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。

4.特異性強(qiáng),適應(yīng)不同樣本:通過抗體封閉聚合酶活性,有極強(qiáng)的特異性,可完美識(shí)別植物(種子、葉子、果實(shí))、動(dòng)物(細(xì)胞、組織)等樣本的目標(biāo)基因擴(kuò)增。

圖3:以1 μg不同物種的RNA為模板(紅色:人肝癌細(xì)胞;藍(lán)色:雞;黑色:斑馬魚;紫色:水稻種子;黃色:番茄果),用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,得到cDNA產(chǎn)物。再以100 ng不同物種的 cDNA為模板,用Biomarker 2×SYBR Green Fast qPCR Mix進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。

5. 重復(fù)性好 :設(shè)置20個(gè)復(fù)孔,S型擴(kuò)增曲線幾乎重合。

圖4:以1μg水稻種子的RNA為模板,用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,得到cDNA產(chǎn)物。再以100 ng的 cDNA為模板,設(shè)置20個(gè)復(fù)孔,用Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。

轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目文章發(fā)表,大部分的驗(yàn)證都采用了qPCR方案,統(tǒng)計(jì)部分百邁客成功案例:人、鼠、家禽、水產(chǎn)、昆蟲、經(jīng)濟(jì)作物、林木、花卉果蔬等。

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